丙酸蛛網菌探針法熒光定量PCR試劑盒實驗操作

丙酸蛛網菌探針法熒光定量PCR試劑盒實驗操作:

1. 模板制備（樣本制備區）

建議使用配套水生動物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產品，具體過程詳見產品說明書。

2．添加模板（模板添加區，放置于冰盒中進行）

請于-20℃條件下保存，有效期 12 個月

取出所需測試數的已含有反應液 A-TSV-I 的 PCR 管，將試劑*解凍，離心 30 秒，在管蓋上標記管名（陰性對照管 NG、樣品 XX、陽性對照管 PG）。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I，蓋上陰性對照管管蓋，其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板，順序為待測樣品模板、PG-TSV-I，依次蓋好各管管蓋，離心 30 秒，立即進行擴增反應。

3. 擴增反應（擴增及產物分析區）

①恒溫儀器 63℃條件下反應 60 min。待儀器升溫至 63℃后，新建程序，設置實驗名稱及反應時間，將步驟 2中離心后的 PCR 反應管放入恒溫熒光分子檢測儀，點擊開始檢測。

②若使用熒光定量 PCR 儀，則熒光基團選擇 FAM，淬滅基團選擇 None，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個循環，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號，60 個循環。其他儀器請參照儀器說明書進行設置。

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