組織相容性抗原HLAF抗體的生物素化標記實驗要點

組織相容性抗原HLAF抗體的生物素化標記實驗要點：

1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件；
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活；
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；
5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性；
6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合；
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用；
8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導(dǎo)致高本底。

磷酸化Ack1抗體
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體
磷酸化毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗體
磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體
磷酸化ATR抗體
細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體
天門冬酰胺連接糖基化11抗體
細胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體
氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
唾液酸糖蛋白受體1抗體
芳香基硫酸酯酶F抗體
A激酶錨定蛋白5抗體
小腦脊髓共濟失調(diào)蛋白3抗體
ASTE1蛋白抗體
磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體
微絲相關(guān)蛋白1抗體
腺苷A1A受體抗體
芳基硫酸酯酶B抗體
γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
共濟失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體
腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶