豬胸膜肺炎放線桿菌PCR試劑盒擴(kuò)增產(chǎn)物分析

豬胸膜肺炎放線桿菌PCR試劑盒擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒(méi)有條帶或條帶很淺

1)zui常見(jiàn)的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系

3) 與反應(yīng)起始時(shí)RNA的總量及純度有關(guān)

4) 建議在試驗(yàn)中加入對(duì)照RNA

5) di一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過(guò)1/10

6) 目的mRNA中含有強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn)，可以試用以下方法解決：

a. 將di一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。

b. 使用隨機(jī)六聚體代替Oligo(dT)進(jìn)行di一鏈反應(yīng)。

7) 建議用Oligo(dT)或隨機(jī)引物代替基因特異性引物（GSP）用于di一鏈合成。由于RNA模板存在二級(jí)結(jié)構(gòu)，如環(huán)狀結(jié)果，有可能導(dǎo)致GSP無(wú)法與模板退火；或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無(wú)法從此引物進(jìn)行有效延伸。